Phase II validation study of the rK39 ELISA prototype for the diagnosis of canine visceral leishmaniasis in Brazil / Estudo de validação da fase II do teste ELISA rK39 para o diagnóstico da leishmaniose visceral canina no Brasil / Estudio de validación de la fase II del test ELISA rK39 para el diagnóstico de la leishmaniasis visceral canina en Brasil

Abstract: Dogs are the main reservoirs in the domestic transmission cycle of visceral leishmaniasis, and the diagnosis is essential for the effectiveness of the control measures recommended by the Brazilian Ministry of Health. We assessed the diagnostic performance of the ELISA-Vetlisa/BIOCLIN prototype with serum samples from 200 dogs, in triplicate, including symptomatic, oligosymptomatic, asymptomatic, and healthy dogs, originated by two distinct panels (A and B) characterized by parasitological tests as the reference standard. In this study, the prototype kit showed a 99% sensitivity (95%CI: 94.5-100.0) and a 100% specificity (95%CI: 96.4-100.0). The sensitivity of the prototype kit did not vary significantly with the clinical status of the dogs. Considering the final result classification (positive or negative), agreement between the results of repeated tests was almost perfect (kappa = 0.99; 95%CI: 0.98-1.00). ELISA-Vetlisa/BIOCLIN is a promising option for the serological diagnosis of canine visceral leishmaniasis in Brazil.

Resumo: Os cães são os principais reservatórios do ciclo de transmissão domiciliar da leishmaniose visceral, e o diagnóstico é essencial para a efetividade das medidas de controle recomendadas pelo Ministério da Saúde. Os autores avaliam o desempenho diagnóstico do protótipo da ELISA-Vetlisa/BIOCLIN em amostras sorológicas de 200 cães, em triplicata, incluindo cães sintomáticos, oligossintomáticos e saudáveis, com dois painéis distintos (A e B) caracterizados por testes parasitológicos enquanto referência. No estudo, o kit-protótipo mostrou sensibilidade de 99% (IC95%: 94,5-100,0) e especificidade de 100% (IC95%: 96,4-100,0). A sensibilidade do kit-protótipo não variou de maneira significativa de acordo com o estado clínico dos cães. Considerando a classificação final dos resultados (positivo ou negativo), a concordância entre os resultados dos testes em triplicata foi quase perfeita (kappa = 0,99; IC95%: 0,98-1,00). O protótipo ELISA-Vetlisa/BIOCLIN tem o potencial de ser utilizada para o diagnóstico sorológico da leishmaniose visceral canina no Brasil.

Resumen: Los perros son los principales reservorios en el ciclo de transmisión doméstica de la leishmaniasis visceral, por ello el diagnóstico es esencial para la efectividad de las medidas de control recomendadas por el Ministerio de Salud de Brasil. Evaluamos el desempeño diagnóstico de ELISA-Vetlisa/BIOCLIN prototipo con muestras de sérum de 200 perros, en triplicado, incluyendo sintomático, oligosintomático, asintomático y perros sanos, originadas por dos paneles distintos (A y B), caracterizados por test parasitológicos como referencia estándar. En este estudio, el kit prototipo mostró un 99% de sensibilidad (IC95%: 94,5-100,0) y un 100% de especificidad (IC95%: 96,4-100,0). La sensibilidad del kit prototipo no varió significativamente con el estatus clínico de los perros. Considerando la clasificación final del resultado (positiva o negativa), el acuerdo entre los resultados de los tests repetidos fue casi perfecto (kappa = 0,99; IC95%: 0,98-1,00). ELISA-Vetlisa/BIOCLIN tiene potencial para ser usado para el diagnóstico serológico de la leishmaniasis visceral canina en Brasil.

Indirect ELISA (iELISA) standardization for the diagnosis of bovine enzootic leukosis / Padronização de um ELISA indireto (iELISA) para diagnóstico da leucose enzoótica bovina

Enzootic bovine leukosis (EBL) is an infectious disease caused by bovine leukemia virus (BLV) that affects cattle worldwide. Agar gel immunodiffusion (AGID) was the reference test for EBL diagnosis for many years, but enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) showed higher sensitivity, was faster to perform, and resulted in an objective reading. However, the importation of ELISA kits is lengthy and expensive, and currently, no AGID kits are available in Brazil. The aim of this work was to standardize an indirect ELISA (iELISA) for EBL diagnosis using BLV antigens produced in Tadarida brasiliensis lung (Tb1Lu) cells, which are Bovine viral diarrhea virus (BVDV) free, unlike fetal lamb kidney (FLK) cells, currently used for this purpose. Following standardization, iELISA results were compared with those obtained by AGID and the commercial Chekit Leucose-Serum ELISA. Compared to AGID, iELISA had 94,44% sensitivity, 75.68% specificity, 79.10% positive predictive value (PPV) and 93.30% negative predictive value (NPV), with 84% concordance and a Kappa index of 0.699. Compared to the Chekit Leucose-Serum ELISA, iELISA showed 92.60% sensitivity, 87.09% specificity, 90.27% PPV and 90,00% NPV, with 90.27% concordance and a Kappa index of 0.801. Taking into account the high agreement with the traditional tests and the absence of non-specific reactions with BVDV, the developed assay could be used as diagnostic method to control EBL in Brazil.(AU)

A leucose enzoótica bovina (LEB) é uma doença infecciosa natural dos bovinos com distribuição mundial causada pelo "bovine leukemia virus" (BLV). A imunodifusão em gel de ágar (IDGA) foi considerada por muitos anos o teste de eleição, porém ensaios imunoenzimáticos (ELISA) apresentam sensibilidade mais elevada e leitura mais rápida e objetiva. No entanto, a importação de kits de ELISA é um processo dispendioso e demorado, e atualmente não há kits de IDGA comercialmente disponíveis no Brasil. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi padronizar um ELISA indireto (iELISA) para diagnóstico da LEB utilizando antígenos produzidos a partir do cultivo do BLV em linhagem celular Tadarida brasiliensis "lung" (Tb1Lu) livre de "bovine viral diarrhea virus" (BVDV), diferentemente do que acontece com as linhagens "fetal lamb kidney" (FLK) atualmente utilizadas na produção desses antígenos para uso em ensaios sorológicos. Após a padronização do iELISA, os resultados foram comparados com aqueles obtidos por IDGA e pelo ELISA comercial "Chekit Leucose-Serum". Comparado ao IDGA, o iELISA apresentou 94,44% de sensibilidade, 75,68% de especificidade, valor preditivo positivo (VPP) de 79,1% e valor preditivo negativo (VPN) de 93,3%, com concordância entre os testes de 84% e o índice Kappa 0,699. Quando comparado ao ELISA "Chekit Leucose-Serum", o iELISA apresentou sensibilidade de 92,6%, especificidade de 87,09%, VPP de 90,27% e VPN de 90%, com concordância de 90,27% e o índice Kappa 0,801. Portanto, devido à alta concordância com os testes tradicionais e ausência da ocorrência de reações inespecíficas com BVDV, o ensaio desenvolvido pode ser utilizado como ferramenta diagnóstica para o controle da LEB no Brasil.(AU)

Detección de trazas de soja y de leche en productos libres de gluten: desarrollo de dos enzimoinmunoensayos competitivos / Detection of traces of soy and milk in gluten-free products: development of two competitive enzyme immunoassays / Detecção de vestígios de soja e leite em produtos livres de glúten: desenvolvimento de dois enzimoimunoensaios competitivos

Resumen El objetivo del presente trabajo fue el desarrollo de dos enzimoinmunoensayos competitivos (EIC) para la detección de trazas de soja y de leche en productos libres de gluten. Como anticuerpos primarios se utilizaron antisueros policlonales de conejo específicos contra proteínas de soja o de leche. Se determinaron las concentraciones óptimas de antígenos a inmovilizar en la placa y las concentraciones de anticuerpos primarios a utilizar en la competencia. Las curvas de calibración se ajustaron utilizando concentraciones crecientes de un extracto de producto de soja y de un extracto de leche descremada en polvo. El producto de soja y la leche descremada se extrajeron con buffer Tris-HCl 0,0625 M con dodecilsulfato de sodio al 3% y sulfito de sodio 0,1 M al 2%. Se evaluaron los parámetros de validación: linealidad, límites de detección y de cuantificación, recuperación y precisión en el día y entre días, los cuales resultaron adecuados. Se analizaron 9 productos libres de gluten con los EIC desarrollados y con kits de ELISA comerciales. Ambos EIC se comportaron de manera similar con respecto a los kits comerciales. Los EIC permitieron confirmar la presencia de leche en las muestras que la declaraban. En algunas muestras que no declaraban ni leche ni soja, ambos EIC detectaron su presencia (resultados confirmados con los kits comerciales). Los EIC desarrollados poseen menor costo que los kits y, por lo tanto, éstos podrían utilizarse como métodos de screening. Cuando esta metodología resulte negativa, debe confirmarse con un método más sensible (comercial) para garantizar la ausencia de proteínas de soja o de leche.

Abstract The aim of this study was to develop two competitive enzyme immunoassays (CEI) to detect the presence of traces of soy and milk in gluten-free products. Specific rabbit polyclonal antiserums against soy protein and other against elemilk protein were used as primary antibodies. Optimal antigen concentrations to be immobilized on the plate and primary antibody concentrations to be used in competition were determined. The calibration curves were fitted using increasing concentrations of an extract of soy product and of defatted milk powder. The soy product and the defatted milk were extracted with Tris-HCl buffer 0,0625 M with 3% sodium dodecyl sulfate and 2% sodium sulfite 0.1 M. The validation parameters were evaluated: linearity, limit of detection and quantification, recovery and precision on the day and in between days. They were appropriate. Nine commercial samples of gluten-free products were analyzed with these developed CEI and commercial ELISA kits. It was observed that both CEI behaved similarly with respect to the commercial kits. The enzyme immunoassays confirmed the presence of milk in samples that declared it. In some samples that did not declare the presence of milk or soy, both enzyme immunoassays detected their presence -these results were confirmed using commercial kits. The developed CEI have a lower cost than the commercial kits, so these could be used as screening methods. When this methodology is negative, it should be confirmed with a more sensitive (commercial) method to ensure the absence of soy or milk protein.

Resumo O objetivo do presente trabalho foi o desenvolvimento de dois enzimoimunoensaios competitivos (EIC), para a detecção de vestígios de soja e leite em produtos livres de glúten. Antissoros policlonais de coelho específicos contra proteínas de soja ou de leite foram utilizados como anticorpos primários. Foram determinadas as concentrações ótimas de antígenos a serem imobilizados na placa e as concentrações de anticorpos primários a serem utilizadas na competição. As curvas de calibração foram ajustadas usando concentrações crescentes de um extrato de produto de soja e de um extrato de leite em pó desnatado. O produto de soja e o leite desnatado foram extraídos com tampão Tris-HCl 0,0625 M com dodecil sulfato de sódio a 3% e sulfito de sódio 0,1 M a 2%. Os parâmetros de validação foram avaliados: linearidade, limite de detecção e quantificação, recuperação e precisão no dia e entre os dias, os quais resultaram adequados. Nove produtos livres de glúten foram analisados com os EIC desenvolvidos e com kits de ELISA comerciais. Os dois EICs se comportaram de maneira semelhante em relação aos kits comerciais. Os EIC permitiram confirmar a presença de leite nas amostras que o declararam. Em algumas amostras que declaravam nem leite nem soja, ambos os EIC detectaram sua presença (resultados confirmados usando kits comerciais). Os EIC desenvolvidos têm um custo menor que os kits, portanto, eles poderiam ser utilizados como métodos de triagem. Quando esta metodologia é negativa, deve ser confirmada com um método mais sensível (comercial) para garantir a ausência de proteínasda soja ou do leite.

Performance evaluation of an indirect immunofluorescence kit for the serological diagnosis of dengue / Avaliação do desempenho de kit de imunofluorescência indireta para o diagnóstico sorológico de dengue

ABSTRACT Objective: To evaluate the performance of indirect immunofluorescence for serological diagnosis of dengue virus in a population with high prevalence of arboviruses. Methods: Two-hundred serum samples from patients with clinical suspicion of dengue fever were tested by immunoenzymatic and indirect immunofluorescence assay BIOCHIP® mosaic. Specificity, sensitivity and Kappa coefficient were calculated. Discordant samples were tested by polymerase chain reaction for confirmation. Results: Of the 200 samples, 20% were positive and 80% negative for anti-dengue virus IgM antibodies in the immunoenzymatic test. Of the 40 positives, 25% were negative in indirect immunofluorescence. Of these ten discordant results, only 20% were also negative in the polymerase chain reaction (PCR). Of the 160 negatives in the immunoenzymatic test, 5% were positive in indirect immunofluorescence. Of these nine discordant results, 33% were positive in the PCR. The Kappa coefficient was 0.7 (0.572-0.829). Sensitivity and specificity of indirect immunofluorescence were respectively 75% and 94%. For anti-dengue virus IgG antibodies, of the 200 samples, 15.5% were positive and 84.5% were negative in the immunoenzymatic test. Of the 31 positives, 12.9% were negative in indirect immunofluorescence. Of these four discordant results, 25% were negative in the PCR. Of the 169 negatives, 8% were positive in indirect immunofluorescence. Of these 14 discordant results, 64% were also positive in the PCR. The Kappa coefficient was 0.695 (0.563-0.83). Sensitivity and specificity of indirect immunofluorescence were 87.1% and 91.7%, respectively. Conclusion: For diagnosis of acute infection, the immunoenzymatic test is enough, and the use of additional methods is not warranted. Replacing the immunoenzymatic test by indirect immunofluorescence would compromise the sensitivity for IgM. However, indirect immunofluorescence can distinguish three arboviruses simultaneously, an advantage during concomitant epidemics.

RESUMO Objetivo: Avaliar o desempenho da imunofluorescência indireta no diagnóstico sorológico de dengue em uma população com alta prevalência de arboviroses. Métodos: Duzentas amostras de soro de pacientes com suspeita clínica de dengue foram testadas por ensaio imunoenzimático e imunofluorescência indireta mosaico BIOCHIP®. Foram calculados especificidade, sensibilidade e coeficiente Kappa. Nas amostras discordantes, realizou-se reação em cadeia da polimerase como método confirmatório. Resultados: Das 200 amostras, 20% foram positivas e 80% negativas para IgM antivírus da dengue no ensaio imunoenzimático. Das 40 positivas, 25% foram negativas na imunofluorescência indireta. Destas dez negativas, apenas 20% eram também negativas na reação em cadeia da polimerase. Das 160 negativas no ensaio imunoenzimático, 5% foram positivas na imunofluorescência indireta. Por fim, dentre as nove discordantes, 33% tiveram vírus da dengue detectado na reação em cadeia da polimerase. O coeficiente Kappa foi 0,70 (0,57-0,82). Sensibilidade e especificidade por imunofluorescência indireta foram, respectivamente, 75% e 94%. Para IgG antivírus da dengue, de 200 amostras, 15,5% foram positivas e 84,5% negativas no ensaio imunoenzimático. Das 31 positivas, 12,9% foram negativas na imunofluorescência indireta. Destas quatro discordantes, 25% apresentaram vírus da dengue não detectado na reação em cadeia da polimerase. Das 169 negativas, 8% foram positivas na imunofluorescência indireta. Destas, 64% foram positivas também na reação em cadeia da polimerase. O coeficiente Kappa foi 0,695 (0,56-0,83). Sensibilidade e a especificidade por imunofluorescência indireta foram, respectivamente, 87,1% e 91,7%. Conclusão: Ensaio imunoenzimático seria suficiente para diagnóstico sorológico de infecção aguda, não justificando a incorporação da imunofluorescência indireta. Substituir ensaio imunoenzimático pela imunofluorescência indireta poderia comprometer a sensibilidade para IgM. Contudo, a imunofluorescência indireta auxilia diferenciar três arboviroses simultaneamente, sendo vantajoso em epidemias concomitantes.

Comparison between enzyme-linked immunosorbent assay and indirect immunofluorescence for detection of antineutrophil cytoplasmic antibodies / Comparação entre os métodos de ensaio imunoenzimático e imunoflurescência indireta para a pesquisa de anticorpos anticitoplasma de neutrófilos

ABSTRACT Objective To evaluate the performance of enzyme-linked immunosorbent assay and indirect immunofluorescence methods for the detection of antineutrophil cytoplasmic antibodies in a routine clinical laboratory setting. Methods A total of 227 samples were tested by indirect immunofluorescence and enzyme-linked immunosorbent assay with antigen specificity for antiproteinase 3 and antimyeloperoxidase. The proportions of positive samples were compared by McNemar hypotheses and agreement was described by Cohen's Kappa coefficient. Results The agreement of the tests was 96.5%, and the Kappa coefficient obtained was 0.70 (95%CI: 0.50-0.90; p<0.001). Considering indirect immunofluorescence as the gold standard, the sensitivity of the enzyme-linked immunosorbent assay was 0.62 and the specificity was 0.99, with diagnostic accuracy in 96% of cases. Some samples were negative in enzyme-linked immunosorbent assay and positive in indirect immunofluorescence. This situation occurred in all immunofluorescence patterns, but particularly in atypical patterns. Two samples with antiproteinase 3 positivity were considered negative in indirect immunofluorescence. Conclusion The enzyme-linked immunosorbent assay had high specificity but lower sensitivity. The performance of indirect immunofluorescence increases diagnostic sensitivity, while the search for antiproteinase 3 by enzyme-linked immunosorbent assay may also add diagnostic power.

RESUMO Objetivo Avaliar o desempenho das metodologias de ensaio imunoenzimático e imunofluorescência indireta para a detecção de anticorpos anticitoplasma de neutrófilos em um contexto de laboratório clínico de rotina. Métodos Foram testadas 227 amostras pelas metodologias de imunofluorescência indireta e ensaio imunoenzimático com especificidades para anticorpos antiproteinase-3 e antimieloperoxidase. As proporções de amostras positivas foram comparadas por hipóteses de McNemar, e a concordância foi descrita pelo coeficiente Kappa de Cohen. Resultados A concordância dos testes foi 96,5%, e o coeficiente Kappa obtido foi 0,70 (IC95%: 0,50-0,90; p<0,001). Utilizando a imunofluorescência indireta como padrão-ouro, a sensibilidade do ensaio imunoenzimático foi de 0,62 e a especificidade, 0,99, com acurácia diagnóstica em 96% dos casos. Algumas amostras apresentaram resultados negativos por ensaio imunoenzimático e positivos por imunofluorescência. Isso ocorreu em amostras com vários padrões de fluorescência, mas particularmente nos casos com padrões atípicos. Duas amostras com positividade antiproteinase 3 foram consideradas negativas por imunofluorescência. Conclusão Os métodos de ensaio imunoenzimático tiveram alta especificidade, mas sensibilidade inferior. A realização da imunofluorescência indireta aumenta a sensibilidade diagnóstica, ao mesmo tempo que a pesquisa de antiproteinase 3 por ensaio imunoenzimático também pode agregar poder diagnóstico.

Clinical, laboratorial diagnosis and prophylaxis of measles in Brazil / Diagnóstico clínico, laboratorial e profilático do sarampo no Brasil

ABSTRACT Measles is an acute febrile exanthematic disease of viral etiology, highly contagious, being the cause of morbidity and mortality of children in developing countries, whereas it has become rarer in developed countries due to vaccination. Its differential diagnosis should be made with other childhood viral respiratory diseases such as influenza, rhinovirus and adenovirus, and exanthematic febrile diseases such as rubella, roseola and varicella. In tropical regions, it should be performed with dengue, zika and chikungunya. Its clinical picture presents the following phases: incubation, usually asymptomatic; a prodrome, in which fever, malaise, coryza can occur, besides Koplik's signs; exanthematic, with presence of maculopapular exanthema after the fever condition that progresses to a craniocaudal evolution, with clinical improvement in uncomplicated cases. Common complications are pneumonia, otitis media, keratitis; the rarest are acute disseminated encephalomyelitis and subacute sclerosing panencephalitis. Nonspecific laboratory alterations are seen in the blood count. The specific laboratory diagnosis is based on the detection of viral ribonucleic acid (RNA) [polymerase chain reaction (PCR) of nasal swab samples, oral mucosa or urine]. Immunoglobulin class M (IgM) can be detected during the exanthematous period by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and immunoglobulin class G (IgG) throughout the convalescence period, and the detection of specific IgG by the plaque reduction neutralization test may also be performed. The prophylaxis of the disease is based on vaccination in children from 15 months in order to reach about 85% to 95% of the population, what confers herd immunity. Thus, vaccination is the most effective measure in combating measles, since the treatment consists only of clinical and symptomatic support.

RESUMEN El sarampión es una enfermedad exantemática febril aguda de etiología viral altamente contagiosa. Causa morbilidad y mortalidad de niños en países en desarrollo, mientras que se hizo más raro en países desarrollados gracias a la vacunación. El diagnóstico diferencial se hace con otras enfermedades infantiles, como influenza, rinovirus, adenovirus, rubéola, roséola y varicela. En regiones tropicales, incluye dengue, zika y chikungunya. Su cuadro clínico presenta las siguientes fases: incubación - en general asintomática; pródromo - en la cual pueden ocurrir fiebre, malestar y coriza, además de manchas de Koplik; y la exantemática - con presencia de exantema máculo-papular después del cuadro febril, que se disemina desde la cara a tronco y extremidades, con mejora clínica en casos no complicados. Complicaciones comunes son neumonía, otitis media y queratoconjuntivitis; las más raras, encefalomielitis aguda diseminada y panencefalitis esclerosante subaguda. Alteraciones inespecíficas de laboratorio son vistas en el hemograma. El diagnóstico específico de laboratorio se basa en el aislamiento del ácido ribonucleico (ARN) viral (PCR de muestras nasales, mucosa oral u orina). La inmunoglobulina M (IgM) pude ser detectada durante el período exantemático por ensayo por inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA); la inmunoglobulina G (IgG), a lo largo del período de convalecencia, y la detección de IgG específica por la prueba de neutralización por reducción de placa. La profilaxis de la enfermedad se basa en vacunación en niños desde los 15 meses de edad, buscando alcanzar 85%-95% de la población, lo que confiere inmunidad de grupo. La vacunación es la medida más eficaz en el combate al sarampión, puesto que el tratamiento consiste sólo en soporte clínico.

RESUMO O sarampo é uma doença exantemática febril aguda de etiologia viral altamente contagiosa. É causa de morbidade e mortalidade de crianças em países em desenvolvimento, ao passo que se tornou mais rara em países desenvolvidos devido à vacinação. O diagnóstico diferencial deve ser realizado em relação a outras doenças da infância, como influenza, rinovírus, adenoviroses, rubéola, roséola e varicela. Já em regiões tropicais, inclui dengue, vírus da zika e chikungunya. Seu quadro clínico apresenta as seguintes fases: a de incubação - em geral assintomática; a prodrômica - na qual podem ocorrer febre, mal-estar e coriza, além de sinais de Koplik; e a exantemática - com presença de exantema maculopapular após o quadro febril, que progride de forma craniocaudal, com melhora clínica em casos não complicados. Complicações comuns são pneumonia, otite média e ceratoconjuntivite; as mais raras, encefalomielite disseminada aguda e panencefalite esclerosante subaguda. Alterações laboratoriais inespecíficas são vistas no hemograma. O diagnóstico laboratorial específico baseia-se na detecção do ácido ribonucleico (RNA) viral [reação em cadeia da polimerase (PCR) de amostras de swab nasal, mucosa oral ou urina]. Imunoglobulina da classe M (IgM) pode ser detectada durante o período exantemático por ensaio de imunoadsorção enzimática (ELISA) e imunoglobulina da classe G (IgG), ao longo do período de convalescença, podendo também ser realizada a detecção de IgG específica pelo teste de neutralização por redução de placas. A profilaxia da doença é baseada na vacinação em crianças a partir dos 15 meses de idade, visando atingir cerca de 85% a 95% da população, o que confere imunidade de rebanho. A vacinação é a medida mais eficaz no combate ao sarampo, visto que o tratamento consiste apenas em suporte clínico.

Neurofilament light chain in the assessment of patients with multiple sclerosis / Neurofilamento de cadeia leve na avaliação de pacientes com esclerose múltipla

ABSTRACT Multiple sclerosis (MS) is an autoimmune, inflammatory, and degenerative disease of the central nervous system. Axonal degeneration is triggered by inflammation and is the pathological substrate of progressive disability in patients with MS. Therapeutic interventions can reduce inflammatory activity, thus delaying neurodegeneration and the progression of disability. Disease activity and neurodegeneration are assessed mainly through clinical evaluation and magnetic resonance imaging. These measures lack sensitivity and accuracy, so new biomarkers are necessary. Several markers have been studied and to date the most promising is neurofilament light (NfL), a component of the axonal cytoskeleton, which is released into cerebrospinal fluid (CSF) following axonal damage. In the present study, we review the current knowledge about CSF NfL determination in MS, clinically isolated syndrome, and radiologically isolated syndrome, and critically discuss how CSF NfL measurement may contribute to therapeutic decision-making in these patients.

RESUMO A esclerose múltipla (EM) é uma doença autoimune, inflamatória e degenerativa do sistema nervoso central. A degeneração axonal é deflagrada pelo processo inflamatório e é o substrato patológico da incapacidade na EM. As intervenções terapêuticas reduzem a inflamação retardando a neurodegeneração e a progressão da incapacidade. A neurodegeneração é avaliada pelo quadro clínico e pela ressonância magnética. Estas mensurações não suficientemente acuradas, havendo necessidade de novos biomarcadores. Diversos biomarcadores têm sido estudados e, até o presente, o mais promissor é o neurofilamento de cadeia leve (NfL). O mesmo é um componente do citoesqueleto que é liberado no líquido cefalorraquidiano após injúria axonal. No presente estudo nós revisamos o conhecimento atual acerca do NfL na EM, síndrome clinica isolada e síndrome radiológica isolada, discutindo criticamente como a determinação deste biomarcador pode contribuir na tomada de decisões clínicas.

A quantitative enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of anti-double-stranded DNA IgG antibodies / Reação imunoenzimática (ELISA) quantitativa para detecção de anticorpos IgG anti-DNA de dupla hélice

ABSTRACT Introduction: The detection of anti-double-stranded (ds) deoxyribonucleic acid (DNA) antibodies is one of the classification criteria for diagnosing systemic lupus erythematosus (SLE). Objective: To describe a quantitative enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for detecting anti-dsDNA immunoglobulin class G (IgG) antibodies. Methods: The performance of ELISA was evaluated using the Crithidia luciliae indirect immunofluorescence test (CLIFT) as a reference. Anti-dsDNA IgG antibodies were screened by ELISA and CLIFT in serum samples from 127 patients with SLE, 56 patients with other diseases and 37 healthy persons. The Cochran Q test was used to compare the sensitivity and specificity of the reactions, with differences among the results being considered significant when p ≤ 0.05. Results: ELISA had a sensitivity of 92.9% and a specificity of 94.6%, whereas the sensitivity and specificity of CLIFT were 85.8% and 100%, respectively. ELISA was significantly more sensitive than CLIFT (p = 0.0027), whereas CLIFT was significantly more specific than ELISA (p = 0.0253). Conclusion: ELISA showed excellent results in terms of sensitivity and specificity, with a potential use in research and routine diagnostics.

RESUMEN Introducción: La detección de anticuerpos contra el ácido desoxirribonucleico (ADN) de doble cadena (dc) es uno de los criterios de clasificación para el diagnóstico de lupus eritematoso sistémico (LES). Objetivo: Describir una técnica inmunoenzimática (ELISA) cuantitativa para detección de anticuerpos de inmunoglobulina de clase G (IgG) anti-ADNdc. Métodos: Se evaluó el desempeño de la técnica ELISA mediante el test inmunofluorescencia indirecta con Crithidia luciliae (IFI-CL) como referencia. Anticuerpos IgG anti-ADNdc fueron analizados por ELISA y IFI-CL en muestras de sueros de 127 pacientes con LES, 56 pacientes con otras enfermedades y 37 personas sanas. La prueba Q de Cochran fue utilizada para comparar la sensibilidad y la especificidad de las reacciones considerando diferencias significantes entre los tests cuando p ≤ 0,05. Resultados: La técnica ELISA mostró sensibilidad del 92,9% y especificidad del 94,6%, mientras la sensibilidad y la especificidad de la técnica IFI-CL fueron del 85,8% y 100%, respectivamente. La técnica ELISA mostró sensibilidad significativamente mayor que la obtenida con IFI-CL (p = 0,0027); esta mostró especificidad significativamente mayor que la obtenida con ELISA (p = 0,0253). Conclusión: La técnica ELISA presentó resultados excelentes de sensibilidad y especificidad, con el potencial de ser utilizada en investigación y rutina diagnóstica.

RESUMO Introdução: A detecção de anticorpos contra o ácido desoxirribonucleico (DNA) nativo (ds) é um dos critérios de classificação para o diagnóstico do lúpus eritematoso sistêmico (LES). Objetivo: Descrever uma técnica imunoenzimática enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) quantitativa para a detecção de anticorpos imunoglobulina da classe G (IgG) anti-DNAds. Métodos: O desempenho da técnica ELISA foi avaliado utilizando o teste de imunofluorescência indireta com Crithidia luciliae (CLIFT) como referência. Anticorpos IgG anti-DNAds foram pesquisados por ELISA e CLIFT em amostras de soros de 127 pacientes com LES, 56 pacientes com outras doenças e 37 indivíduos sadios. O teste Q de Cochran foi utilizado para comparar as sensibilidades e as especificidades das reações, considerando diferenças significantes entre os testes quando p ≤ 0,05. Resultados: A técnica ELISA apresentou sensibilidade de 92,9% e especificidade de 94,6%, enquanto a sensibilidade e a especificidade da técnica CLIFT foram de 85,8% e 100%, respectivamente. A técnica ELISA apresentou sensibilidade significativamente maior do que a obtida com a técnica CLIFT (p = 0,0027); esta apresentou especificidade significativamente maior do que a obtida com a técnica ELISA (p = 0,0253). Conclusão: A técnica ELISA apresentou excelentes resultados em termos de sensibilidade e especificidade, podendo ser útil em pesquisa e rotina diagnóstica.

Diagnostic value of α-enolase expression and serum α-enolase autoantibody levels in lung cancer / Valor diagnóstico da expressão de α-enolase e dos níveis séricos de autoanticorpos contra α-enolase no câncer de pulmão

ABSTRACT Objective: To investigate the diagnostic value of α-enolase (ENO1) and serum ENO1 autoantibody levels in lung cancer. Methods: Immunohistochemistry staining and ELISA were performed to detect ENO1 expression in lung tissue and serum ENO1 autoantibody levels, respectively. Results: The expression of ENO1 was higher in lung cancer tissues than in benign lung disease tissues (p < 0.001). The proportion of lung cancer samples expressing ENO1 was not significantly different among the various pathological classification groups. The proportion of samples expressing ENO1 was higher in lung cancer patients in stages I/II than in those in stages III/IV (χ2 = 5.445; p = 0.018). The expression of ENO1 in lung cancer tissues was not associated with age, gender, or smoking history. Serum ENO1 antibody levels were significantly higher in the lung cancer group than in the benign lung disease and control groups (p < 0.001). The differences among the pathological classification groups were not statistically significant. Serum ENO1 antibody levels were also in lung cancer patients in stages I/II than in those in stages III/IV (p < 0.01). Serum ENO1 antibody levels were not associated with age, gender, or smoking history in lung cancer patients. The ROC curve representing the diagnosis of lung cancer based on ENO1 antibody levels had an area under the curve of 0.806. Conclusions: Our results suggest that high levels of ENO1 are associated with the clinical stage of lung cancer and that ENO1 expression and its serum autoantibody levels show diagnostic value in lung cancer.

RESUMO Objetivo: Investigar o valor diagnóstico da α-enolase (ENO1) e dos níveis séricos de autoanticorpos contra ENO1 no câncer de pulmão. Métodos: Marcação imuno-histoquímica e ELISA foram realizados para detectar a expressão de ENO1 no tecido pulmonar e os níveis séricos de autoanticorpos contra ENO1, respectivamente. Resultados: A expressão de ENO1 foi maior nos tecidos de câncer de pulmão que nos tecidos de doença pulmonar benigna (p < 0,001). Não houve diferença significativa entre os diversos grupos de classificação patológica quanto à proporção de amostras de câncer de pulmão que expressaram ENO1. A proporção de amostras que expressaram ENO1 foi maior nos pacientes com câncer de pulmão nos estágios I/II que naqueles com câncer de pulmão nos estágios III/IV (χ2 = 5,445; p = 0,018). Não houve relação entre a expressão de ENO1 em tecidos de câncer de pulmão e idade, sexo ou histórico de tabagismo. Os níveis séricos de anticorpos contra ENO1 foram significativamente maiores no grupo câncer de pulmão que nos grupos doença pulmonar benigna e controle (p < 0,001). As diferenças entre os grupos de classificação patológica não foram estatisticamente significativas. Os níveis séricos de anticorpos contra ENO1 foram também significativamente maiores nos pacientes com câncer de pulmão nos estágios I/II que naqueles com câncer de pulmão nos estágios III/IV (p < 0,01). Nos pacientes com câncer de pulmão, não houve relação entre os níveis séricos de anticorpos contra ENO1 e idade, sexo ou histórico de tabagismo. A curva ROC do diagnóstico de câncer de pulmão baseado nos níveis de anticorpos contra ENO1 apresentou área sob a curva = 0,806. Conclusões: Nossos resultados sugerem que há relação entre níveis elevados de ENO1 e o estágio clínico do câncer de pulmão e que a expressão de ENO1 e os níveis séricos de autoanticorpos contra ENO1 têm valor diagnóstico no câncer de pulmão.

Evaluation of agreement between tests for the diagnosis of leprosy / Avaliação de concordância entre testes para diagnóstico da hanseníase

ABSTRACT Introduction: Leprosy is a chronic infectious disease caused by the intracellular parasite Mycobacterium leprae. The diagnosis is essentially clinical, based on symptoms, skin exam, peripheral nerves and epidemiological history. Laboratory tests are carried out to complement the result of clinical diagnosis, or even serving as a confirmatory method. Objective: To investigate the positivity and agreement between skin smear, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) with synthetic antigen ND-O-BSA, ML Flow test and polymerase chain reaction (PCR) for detection of Mycobacterium leprae in new cases of leprosy. Methods: We conducted a case series study assessing a convenience sample of 39 new cases of leprosy and a control group of 18 household contacts in Belém (PA) and in Igarapé-Açu (PA) from March 2014 to September 2015. Results: The agreement between ELISA, ML Flow and PCR tests combinations showed slight to absent reproducibility (Kappa ≤ 0.24). The results showed greater sensitivity in PCR assay, with higher positivity in multibacillary cases. The ELISA test showed low positivity, even in multibacillary cases, resulting in no reaction to paucibacillary cases and household contacts. Conclusion: The high sensitivity of PCR decreases the agreement with other tests.

RESUMO Introdução: A hanseníase é uma doença infecciosa crônica causada pelo parasita intracelular Mycobacterium leprae. O diagnóstico é essencialmente clínico, com base em sintomas, exame da pele, nervos periféricos e história epidemiológica. Testes laboratoriais são realizados para complementar o resultado de diagnóstico clínico, ou mesmo servindo como método de confirmação. Objetivo: Investigar a positividade e a concordância da baciloscopia, do ensaio de imunoadsorvente ligado à enzima (ELISA) com o antígeno sintético ND-O-BSA, do ML Flow e da reação em cadeia da polimerase (PCR) para a detecção de Mycobacterium leprae em casos novos de hanseníase. Métodos: Foi realizada uma série de casos, avaliando uma amostra de conveniência de 39 novos casos de hanseníase e um grupo-controle de 18 contatos domiciliares em Belém (PA) e Igarapé-Açu (PA) a partir de março 2014 a setembro de 2015. Resultados: A concordância entre as combinações ELISA, ML Flow e PCR mostrou reprodutibilidade leve a ausente (Kappa ≤ 0,24). Os resultados mostraram maior sensibilidade no ensaio de PCR, com maior positividade em casos multibacilares. O teste ELISA mostrou baixa positividade, mesmo em casos multibacilares, resultando em nenhuma reação nos casos paucibacilares e contatos domiciliares. Conclusão: A alta sensibilidade da PCR diminui a concordância com outros testes.

Metanálisis sobre la utilidad de ELISA, PCR e inmunocromatografía en el diagnóstico de chikungunya / Meta-analysis of the usefulness of ELISA, PCR, and immunochromatography for the diagnosis of Chikungunya / Meta-análise da utilidade dos exames ELISA, PCR e imunocromatografia no diagnóstico de febre chikungunya

RESUMEN Objetivo Evaluar la utilidad de ELISA, PCR e inmunocromatografía para el diagnóstico de chikungunya. Métodos Se realizó un metanálisis de estudios que reportaran datos de validez diagnóstica, a partir de un protocolo ex-ante con seis estrategias de búsqueda en tres bases de datos multidisciplinarias. Se garantizó la reproducibilidad en la selección y extracción de información, se evaluó la calidad con la guía QUADAS (Quality Assessment of studies of Diagnostic Accuracy), los análisis se realizaron en MetaDisc con medidas puntuales, intervalos de confianza y resultados combinados bajo un modelo de efectos aleatorios. Resultados Se incluyeron 19 estudios, uno con ELISA para anticuerpos IgG, dos con ELISA para antígenos, cinco con ELISA de anticuerpos IgM, ocho con qPCR y tres con inmunocromatografía. Los artículos fueron publicados entre 2009 y 2015, principalmente en India (37%), usando como prueba de referencia la combinación de sintomatología clínica, RT-PCR, ELISA, ensayo de neutralización o aislamiento viral. La población fue 1 108 individuos sanos, 394 con otra infección (principalmente dengue) y 1 288 con chikungunya. En ELISA para IgM y qPCR la sensibilidad y especificidad fueron mayores al 90%, el cociente de probabilidad positivo mayor a 10, el cociente de probabilidad negativo menor a 0,1; razón de Odds diagnóstica mayor a 100 y área bajo la curva de 0,99. Conclusión Se halló una excelente utilidad diagnóstica de la ELISA IgM y qPCR, mientras que para inmunocromatografía la utilidad fue escasa.

ABSTRACT Objective Evaluate the usefulness of ELISA, PCR, and immunochromatography for the diagnosis of Chikungunya. Methods A meta-analysis of studies reporting diagnostic validity data was performed, using an ex-ante protocol with six search strategies in three multidisciplinary databases. Replicability in the selection and retrieval of information was guaranteed; quality was evaluated using the QUADAS (Quality Assessment of Diagnostic Accuracy Studies) guide; the analyses were performed in MetaDisc, with specific measures, confidence intervals, and combined results under a random-effects model. Results A total of 19 studies were included, one with IgG ELISA, two with antigencapture ELISA, five with IgM ELISA, eight with qPCR, and three with immunochromatography. The articles were published primarily in India (37%) between 2009 and 2015, using a combination of clinical symptoms, RT-PCR, ELISA, neutralization assay, or viral isolation as the reference test. The population consisted of 1 108 healthy individuals, 394 with another infection (mainly dengue), and 1 288 with Chikungunya. In IgM ELISA and qPCR, the sensitivity and specificity were greater than 90%, the positive probability quotient was greater than 10, the negative probability quotient was less than 0.1, the diagnostic odds ratio was greater than 100, and the area under the curve was 0.99. Conclusion IgM ELISA and qPCR were found to be excellent for diagnosis, while immunochromatography was only of limited usefulness.

RESUMO Objetivo Avaliar a utilidade dos exames ELISA, PCR e imunocromatografia no diagnóstico de febre chikungunya. Métodos Uma meta-análise de estudos com dados de validade diagnóstica foi conduzida em três bases de dados multidisciplinares segundo um protocolo de avaliação ex-ante contendo seis estratégias de busca. Foi garantida a reprodutibilidade na seleção e extração de informação e avaliada a qualidade segundo os critérios do guia QUADAS (Quality Assessment of Studies of Diagnostic Accuracy). As análises foram realizadas no programa Meta-DiSc com estimativas pontuais, intervalos de confiança e resultados combinados em um modelo de efeitos aleatórios. Resultados A meta-análise incluiu 19 estudos, a saber: um sobre ELISA de anticorpos IgG, dois sobre ELISA de antígenos, cinco sobre ELISA de anticorpos IgM, oito sobre PCR quantitativa (qPCR) e três sobre imunocromatografia. Os artigos foram publicados entre 2009 e 2015, sobretudo na Índia (37%), e usaram como referência critérios clínicos, PCR em tempo real (RT-PCR), ELISA, ensaio de neutralização ou isolamento viral. A população abrangeu 1.108 indivíduos saudáveis, 394 que apresentavam outra infecção (mais comumente, dengue) e 1.288 com febre chikungunya. Com relação ao ELISA-IgM e qPCR, a sensibilidade e a especificidade foram superiores a 90%, a razão de probabilidade positiva foi maior que 10 e a razão de probabilidade negativa menor que 0,1, a razão de chances diagnóstica foi maior que 100 e a área sob a curva foi de 0,99. Conclusão Verificou-se excelente utilidade diagnóstica do ELISA-IgM e qPCR e baixa utilidade da imunocromatografia no diagnóstico de febre chikungunya.

Influência do ressecamento da superfície radicular, do tratamento com EDTA e ácido Hialurônico na viabilidade e expressão de citocinas inflamatórias de fibroblastos do ligamento periodontal / Influence of root surface dryness and treatment with EDTA and Hyaluronic acid on the viability and expression of inflammatory cytokines of periodontal ligament fibroblasts

O momento ideal para o reimplante de um dente avulsionado é imediatamente após a avulsão, no entanto, isso nem sempre é possível. Uma série de fatores influenciam na viabilidade das células do ligamento periodontal (PDL) contribuindo para acelerar ou minimizar a ocorrência da reabsorção radicular ou anquilose, consequências mais frequentes dos reimplantes. Um destes fatores é o período extra-oral e o tratamento da superfície radicular. O EDTA (ácido etilenodiamino tetracético) a 17% e o ácido hialurônico (AH) são utilizados para tratar a superfície radicular, visando menor ocorrência de reabsorção inflamatória e por substituição. Sendo assim, os objetivos deste estudo foram: a) avaliar a viabilidade de fibroblastos do ligamento periodontal (PDLF) em contato com discos radiculares submetidos ou não ao ressecamento de superfície por diferentes tempos e tratados com EDTA e/ou AH; b) quantificar as citocinas inflamatórias IL-6, IL-8, IL-1ß e TNF-α expressas por PDLF; c) observar a adesão de PDLF na superfície do discos radiculares tratados. Foram obtidos 108 discos de dentina e cemento da superfície radicular de dentes bovinos, com 4,5 mm de diâmetro, que foram previamente submetidos a dissolução do ligamento periodontal em solução de hipoclorito de sódio 1% por 15 min. Em seguida os discos foram esterilizados em concentrações decrescentes de álcool (100%,90%,80% e 70%). Os espécimes foram submetidos ou não ao ressecamento radicular por 1h ou 24h e tratados com EDTA associado ou não ao ácido hialurônico, colocados em placas de 96 poços onde foram semeadas células de culturas primárias de PDLF, que ficaram em contato com os discos por 48 h. A viabilidade celular na superfície dos discos foi avaliada através do ensaio de XTT. A microscopia eletrônica de varredura foi utilizada para verificar a adesão de PDLF à superfície dos discos. A detecção e quantificação das citocinas foi realizada pelo teste ELISA. Os dados foram submetidos à análise estatística pelo teste ANOVA e Tukey (p < 0,05). A maior média foi apresentada no grupo sem ressecamento para o tratamento EDTA+AH (148,39), que diferiu significativamente dos grupos controle e EDTA. No grupo ressecamento 1 h EDTA+AH (144,91) foi diferente dos demais. Para ressecamento 24h, verificou-se que o grupo EDTA+AH diferiu do grupo controle. Não houve modificações na expressão das citocinas IL-6, IL-8, IL-1ß e TNF-α quando foi acrescentado os tratamentos propostos. A IL-6 mostrou uma diminuição quando em contato com AH no periodo de 24h. Foi observada pelo MEV adesão de PDLF na superfície de todos os discos tratados e em todos os períodos analisados. Conclui-se que o ácido hialurônico é uma alternativa de tratamento para casos de dentes avulsionados já que mostrou seu papel promovendo adesão e aumento da viabilidade(AU)

The ideal time for reimplantation of an avulsed tooth is immediately after avulsion, however, this is not always possible. A number of factors influence the viability of the cells of the periodontal ligament (PDL) contributing to accelerate or minimize the occurrence of root resorption or ankylosis, more frequent consequences of reimplantation. One of these factors is the extra-oral period and root surface treatment. EDTA (17% ethylenediaminetetraacetic acid) and hyaluronic acid (HA) are used to treat the root surface, aiming for a lower occurrence of inflammatory resorption and replacement. Thus, the objectives of this study were: a) to evaluate the viability of periodontal ligament fibroblasts (PDLF) in contact with root disks submitted to surface dryness at different times and treated with EDTA and / or AH; b) quantify the inflammatory cytokines IL-6, IL-8, IL-1ß and TNF-α expressed by PDLF; c) observe the adhesion of PDLF on the surface of the treated root discs. 108 dentin and cementum disks were obtained from the root surface of bovine teeth, 4.5 mm in diameter, which were previously submitted to dissolution of the periodontal ligament in 1% sodium hypochlorite solution for 15 min. Then the disks were sterilized in decreasing concentrations of alcohol (100%, 90%, 80% and 70%). The specimens were submitted to root resection for 1 h or 24 h and treated with EDTA, whether or not associated with hyaluronic acid, placed in 96-well plates where cells from PDLF primary cultures were seeded and left in contact with the discs for 48 h. Cell viability at disc surfaces was assessed by the XTT assay. Scanning electron microscopy was used to verify the adhesion of PDLF to the disc surface. Detection and quantification of cytokines was performed by ELISA. Data were submitted to statistical analysis by the ANOVA and Tukey test (p <0.05). The highest mean was presented in the non-dry group for EDTA + AH treatment (148,39), which differed significantly from the control and EDTA groups. In the dryness group 1 h EDTA + AH (144.91) was different from the others. For dryness 24 h, it was found that the EDTA + AH group differed from the control group. There were no changes in the expression of cytokines IL-6, IL-8, IL-1ß and TNFα when the proposed treatments were added. IL-6 showed a decrease when in contact with HA in the 24-hour period. It was observed by the MEV adhesion of PDLF on the surface of all treated discs and in all periods analyzed. It is concluded that hyaluronic acid is an alternative treatment for cases of avulsed teeth since it showed its role promoting adhesion and increased viability(AU)

Ocorrência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii em caprinos do semiárido baiano / Occurrence of antibodies to Toxoplasma gondii in the Bahia semi-arid goats

Este trabalho teve como objetivo avaliar a frequência de anticorpos IgG específicos contra Toxoplasma gondii em caprinos pertencentes a algumas cidades do semiárido baiano, através do ELISA (ensaio imunoadsorvente ligado à enzima) indireto. Primeiramente, foi realizado um estudo piloto com 49 caprinos para comparar os resultados do ELISA com a RIFI (reação de imunofluorescência indireta) para detecção de anticorpos séricos contra T. gondii. Foram observados 30,6% (15/49) de soropositivos pelo ELISA, enquanto pela RIFI houve 40,8% (20/49) de caprinos reagentes. Desta maneira, o ELISA apresentou 70% de sensibilidade e 96,5% de especificidade. Em seguida, foram analisadas amostras de soros de caprinos provenientes das cidades de Casa Nova, Curaçá, Jaguarari, Juazeiro, Sento Sé e Uauá. Dentre os 375 animais avaliados, 25,1% apresentaram títulos de IgG positivos no ELISA para T. gondii. As fêmeas tiveram um risco 1,236 vezes maior de serem soropositivas em relação aos machos. Não houve relação entre idade e presença de anticorpos anti-T. gondii nestes animais. A cidade com maior número de caprinos soropositivos foi Sento Sé, com 46,4% (39/84) e a menor frequência foi observada em Juazeiro, com 3,6% (2/55). Os resultados deste estudo confirmam que a infecção pelo T. gondii é comum em caprinos brasileiros do estado da Bahia, inclusive na região de clima semiárido, considerada mais desfavorável à transmissão

The objective of this study was to evaluate the frequency of specific IgG antibodies against Toxoplasma gondii in goats belonging to some cities of Semi-Arid region of Bahia, by indirect ELISA (enzyme linked immunonosorbent assay). First, a pilot study was conducted with 49 goats to compare results from ELISA with those obtained by IFAT (indirect fluorescent antibody test) to detect serum antibodies against T. gondii. It was observed 30.6% (15/49) of seropositive by ELISA, while the IFAT showed 40.8% (20/49) reagents goats. Thus, ELISA showed 70% sensitivity and 96.5% specificity. Then, sera samples of goats from the cities Casa Nova, Curaçá, Jaguarari, Juazeiro, Sento Sé and Uauá were analyzed. Among the 375 evaluated animals, 25.1% had positive IgG titers in ELISA for T. gondii. Females have a 1.236 times higher risk of being seropositive compared to males. There was no correlation between age and the presence of anti-T. gondii antibodies in these animals. The city with the biggest number of seropositive goats was Sento Sé, with 46.4% (39/84) and the lowest rate was observed in Juazeiro, with 3.6% (2/55). The results of this study confirm that T. gondii infection is common in goats from the semi-arid climate region of Bahia, which is considered adverse for transmission

Fenômeno de epitope spreading: caracterização clínico imunológica em pacientes portadores de dermatoses bolhosas autoimunes / Epitope spreading" phenomena: clínical and immunopathological characterization in patients with bullous dermatosis

As dermatoses bolhosas autoimunes são um grupo heterogêneo de afecções da pele e/ou mucosas associadas à produção de autoanticorpos dirigidos às moléculas de adesão epitelial. Podem ser classificadas em dermatoses bolhosas intraepidérmicas (pênfigos) ou subepidérmicas (penfigóides, epidermólise bolhosa adquirida). Nos últimos anos, a transição entre dermatoses bolhosas autoimunes ou coexistência de autoanticorpos de diferentes dermatoses têm sido relatadas em alguns pacientes e atribuída ao fenômeno de epitope spreading (ES): a diversificação de epítopos reconhecidos pelo sistema imune evocaria uma reação secundária a antígenos distintos e não relacionados aos da doença primária. Neste trabalho avaliamos a ocorrência de fenômenos de ES em pacientes portadores de pênfigo. CASUÍSTICA E MÉTODOS: Inicialmente, foi realizada análise de dados clínicos e laboratoriais (exame histopatológico, de imunofluorescência direta-IFD, indireta IFI e ELISA) de 351 pacientes portadores de pênfigos acompanhados no Ambulatório de dermatoses bolhosas autoimunes do Departamento de Dermatologia da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo no período de dezembro de 2002 a dezembro de 2012. Foram selecionados pacientes com quadro sugestivo de conversão à dermatose bolhosa distinta da doença primária. RESULTADOS: Nove pacientes apresentaram sinais sugestivos de fenômeno de ES e foram incluídos no estudo: 8 com a conversão de Pênfigo vulgar (PV) a foliáceo (PF) 2,3% (grupo1) e um de PF a Epidermólise bolhosa adquirida (EBA) 0,3% (grupo 2). No grupo 1 o intervalo mediano para a conversão foi de 3,5 anos. Cinco pacientes apresentaram modificação histopatológica de clivagem intraepidérmica na camada suprabasal para clivagem na camada subcórnea durante a suspeita de ES; 2 apresentaram clivagem na camada epidérmica média durante a transição e um manteve clivagem suprabasal, apesar de quadro clínico sugestivo de PF. Todos os pacientes apresentavam...

Autoimmune bullous skin diseases represent a heterogeneous group of disorders of skin and mucosa associated with autoantibodies against distinct adhesion molecules. They can be classified, based on the level of loss of adhesion in intraepidermal and sub epidermal dermatosis. The shift from an autoimmune blistering disease to another has been recently described and attributed to the "epitope spreading" (ES) phenomena. It occurs when a primary inflammatory/autoimmune process releases "hidden" epitopes which are recognized by the lymphocytes and evoke a secondary reaction to antigens distinct from, and non-cross-reactive, with the disease causing-epitope. This study attempted to characterize the occurrence of ES in pemphigus patients. METHODS: We analyzed data from 351 pemphigus patients treated ambulatorially at the Department of Dermatology, Faculty of Medicine, University of São Paulo, from December 2002 to December 2012. A careful search for clinical and laboratorial (histopathology, direct-DIF and indirect-IIF immunofluorescence, ELISA) changes suggestive of shift to a secondary bullous disease was performed. RESULTS: Nine out of 351 patients presented clínical shift and were included in the study: eight from pemphigus vulgaris (PV) to foliaceus (PF) 2.3% (group 1) and one from PF to epidermolysis bullosa acquisita (EBA) 0.3% (group 2). In group 1, median interval of disease shift was 3.5 years. Of 8 patients with clinical PF, five showed change of histopathology pattern from suprabasilar cleavage to subcorneal acantholysis, two had cleavage within the middle epidermal layer, and one sustained the suprabasilar acantholysis. One shifted back to PV after clinical and histopatological changes of PF. All patients showed intercellular IgG and/or C3 deposits during PV and PF diagnosis by DIF. IIF titers varied from 1:160 to 1:5120. ELISA index for Dsg1 varied from 22 to 319; and for Dsg3 from 0.4 to 224 (positive if > 20)....

Influência de diferentes tratamentos físico-químicos na adesão e viabilidade de fibroblastos de ligamento periodontal à superfície radicular simulando dentes avulsionados / Influence of different physical-chemical treatment on periodontal ligament fibroblast adhesion to root surface of simulated avulsed teeth

O reimplante tardio de dentes avulsionados é uma realidade dentro dos consultórios odontológicos. Na tentativa de se restabelecer a arquitetura e a função do ligamento periodontal, além de se evitar a anquilose, evitando ou modulando a reabsorção porsubstituição, a superfície radicular dos dentes avulsionados pode ser tratada com diversas substâncias, dentre elas o EDTA (ácido etilenodiamino tetra-acético) a 17%, sempre visando uma menor chance de ocorrer reabsorção inflamatória e por substituição. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia do tratamento de discos da superfície vestibular de raízes de dentes bovinos, com EDTA 17%, com Emdogain® , com ácido hialurônico e com colágeno, através de testes de viabilidade celular, quantificação das citocinas IL-1ß, IL-6, IL-8, IL-10 eTNF-α por ensaio ELISA, além da ilustração por microscopia eletrônica de varredura da adesão dos fibroblastos sobre os discos de dentina. Foram cortados 155 discos de dentina, com 4,5 mm de diâmetro, da face vestibular da superfície radicular de dentes bovinos, previamente raspados ou não com cureta periodontal. Os discos foram regularizados, limpos e autoclavados. Os espécimes foram tratados com assubstâncias preconizadas e colocados em placas de 96 poços onde foramsemeadas células de culturas primárias de fibroblastos humanos de ligamentoperiodontal, que ficaram em contato com os discos por 48 horas. A sobrevivência e a viabilidade celular na superfície dos discos foram avaliadas através do ensaio de XTT. A microscopia eletrônica de varredura foi utilizada para verificar a adesão de fibroblastos à superfície dos discos. A detecção e quantificação das citocinas foram realizadas pelo teste ELISA. Os dados foram submetidos à análise estatística pelo teste ANOVA e Tukey (p < 0,05). Os resultados obtidos mostraram que o uso de EDTA 17% por 5 minutos sem agitação foi mais eficaz que os outros protocolos (p < 0,05) e aliado ao ácido hialurônico, ...

The delayed reimplantation of avulsed teeth is a reality in dental offices. In an attempt to restore architecture and function of the periodontal ligament,avoiding ankylosis, preventing or modulating the replacement resorption, avulsed teeth root surface may be treated with various substances including EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid) to 17%, always seeking a lower chance ofoccurring inflammatory or replacement resorption. Thus, the aim of this study was to evaluate the effectiveness of the treatment of discs cutted of the vestibular surface of bovine teeth roots with EDTA 17% with Emdogain® with hyaluronic acid and collagen through cell viability tests, quantification of cytokines IL -1ß, IL-6, IL-8, IL-10 andTNF-α by ELISA assay and, in addition, it was taken Illustrations by scanningelectron microscopy of the accession of fibroblasts on the dentin disks. 155 dentin discs with 4,5 mm in diameter will be cut from the vestibular surface of the root surface of bovine teeth, previously scraped or not with periodontal curette. The discs were regularized, cleaned and autoclaved. The specimens were treated with the substances advocated and placed in 96 well plates are seeded in which primary cell cultures of human periodontal ligament fibroblasts that were in contact with the discsfor 48 hours. The survival and cell viability on the surface of the disks are evaluated by XTT assay. The scanning electron microscopy was used to verify adherence of fibroblasts to the surface of the discs. Detection and quantification of cytokines were done by ELISA assay. The data were statistically analyzed by ANOVA and Tukey (p < 0.05). The results showed that the use of 17% EDTA for 5 minutes without stirringwas more effective than the other protocols (p <0.05) and combined with hyaluronic acid was less cytotoxic promoting better cell viability. It was not possible to ensure the fibroblasts display in scanning electron microscopy. As for the ELISA assay, there was ...

Influência de diferentes tratamentos físico-químicos na adesão e viabilidade de fibroblastos de ligamento periodontal à superfície radicular simulando dentes avulsionados / Influence of different physical-chemical treatment on periodontal ligament fibroblast adhesion to root surface of simulated avulsed teeth

O reimplante tardio de dentes avulsionados é uma realidade dentro dos consultórios odontológicos. Na tentativa de se restabelecer a arquitetura e a função do ligamento periodontal, além de se evitar a anquilose, evitando ou modulando a reabsorção porsubstituição, a superfície radicular dos dentes avulsionados pode ser tratada com diversas substâncias, dentre elas o EDTA (ácido etilenodiamino tetra-acético) a 17%, sempre visando uma menor chance de ocorrer reabsorção inflamatória e por substituição. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia do tratamento de discos da superfície vestibular de raízes de dentes bovinos, com EDTA 17%, com Emdogain® , com ácido hialurônico e com colágeno, através de testes de viabilidade celular, quantificação das citocinas IL-1ß, IL-6, IL-8, IL-10 eTNF-α por ensaio ELISA, além da ilustração por microscopia eletrônica de varredura da adesão dos fibroblastos sobre os discos de dentina. Foram cortados 155 discos de dentina, com 4,5 mm de diâmetro, da face vestibular da superfície radicular de dentes bovinos, previamente raspados ou não com cureta periodontal. Os discos foram regularizados, limpos e autoclavados. Os espécimes foram tratados com assubstâncias preconizadas e colocados em placas de 96 poços onde foramsemeadas células de culturas primárias de fibroblastos humanos de ligamentoperiodontal, que ficaram em contato com os discos por 48 horas. A sobrevivência e a viabilidade celular na superfície dos discos foram avaliadas através do ensaio de XTT. A microscopia eletrônica de varredura foi utilizada para verificar a adesão de fibroblastos à superfície dos discos. A detecção e quantificação das citocinas foram realizadas pelo teste ELISA. Os dados foram submetidos à análise estatística pelo teste ANOVA e Tukey (p < 0,05). Os resultados obtidos mostraram que o uso de EDTA 17% por 5 minutos sem agitação foi mais eficaz que os outros protocolos (p < 0,05) e aliado ao ácido hialurônico...

The delayed reimplantation of avulsed teeth is a reality in dental offices. In an attempt to restore architecture and function of the periodontal ligament,avoiding ankylosis, preventing or modulating the replacement resorption, avulsed teeth root surface may be treated with various substances including EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid) to 17%, always seeking a lower chance ofoccurring inflammatory or replacement resorption. Thus, the aim of this study was to evaluate the effectiveness of the treatment of discs cutted of the vestibular surface of bovine teeth roots with EDTA 17% with Emdogain® with hyaluronic acid and collagen through cell viability tests, quantification of cytokines IL -1ß, IL-6, IL-8, IL-10 andTNF-α by ELISA assay and, in addition, it was taken Illustrations by scanningelectron microscopy of the accession of fibroblasts on the dentin disks. 155 dentin discs with 4,5 mm in diameter will be cut from the vestibular surface of the root surface of bovine teeth, previously scraped or not with periodontal curette. The discs were regularized, cleaned and autoclaved. The specimens were treated with the substances advocated and placed in 96 well plates are seeded in which primary cell cultures of human periodontal ligament fibroblasts that were in contact with the discsfor 48 hours. The survival and cell viability on the surface of the disks are evaluated by XTT assay. The scanning electron microscopy was used to verify adherence of fibroblasts to the surface of the discs. Detection and quantification of cytokines were done by ELISA assay. The data were statistically analyzed by ANOVA and Tukey (p < 0.05). The results showed that the use of 17% EDTA for 5 minutes without stirringwas more effective than the other protocols (p <0.05) and combined with hyaluronic acid was less cytotoxic promoting better cell viability. It was not possible to ensure the fibroblasts display in scanning electron microscopy. As for the ELISA assay, there was...

Influence of VEGF-C936T genetic variant on age-related macular degeneration / Influência da variante genética VEGF-C936T na degeneração macular relacionada à idade

ABSTRACTPurpose:To evaluate the association between the VEGF-C936T polymorphism and serum vascular endothelial growth factor (VEGF) levels, lifestyle, and demographic parameters in patients with age-related macular degeneration (AMD).Methods:A total of 183 individuals were enrolled in the present study, including 88 patients with AMD receiving clinical and pharmacological treatment (study group, SG) and 95 individuals without AMD as controls (control group, CG). The presence of the VEGF-C936T polymorphism and serum VEGF levels were determined using polymerase chain reaction/restriction fragment length polymorphism and enzyme-linked immunosorbent assay, respectively. Significance was set at P<0.05 for all statistical analyses.Results:The homozygous wild-type genotype (CC) and the C allele were predominant in both groups (P=0.934 and P=0.938, respectively). Serum VEGF levels (assessed in 57% and 31% of patients in the SG and CG, respectively) were comparable between groups (SG, 307.9 ± 223.6 pg/mL; CG, 305.1 ± 212.3 pg/mL; P=0.955). A significantly higher prevalence of smoking (44% vs 25%; P=0.01) and hypertension (66% vs 48%; P=0.025) was observed in the SG than in the CG. The distribution of alcohol consumption and dyslipidemia was similar between groups (P>0.05).Conclusions:In the present study group of Brazilian patients, the VEGF-C936T polymorphism was not found to be associated with age-related macular degeneration. However, smoking and systemic arterial hypertension (SAH) were found to be potential independent risk factors for the development of age-related macular degeneration. Comparable serum VEGF levels in both study groups may reflect the efficacy of pharmacological treatment of AMD.

RESUMOObjetivo:Avaliar a associação entre o polimorfismo VEGF-C936T, níveis séricos de VEGF (vascular endothelial growth factor), hábitos de vida e antecedentes pessoais em pacientes com degeneração macular relacionada à idade (DRMI).Métodos:Foram estudados 183 indivíduos: 88 pacientes com degeneração macular relacionada à idade, em tratamento clínico e medicamentoso (Grupo Estudo - GE) e 95 indivíduos sem sinais clínicos da doença (Grupo Controle - GC). O polimorfismo VEGF-C936T e os níveis séricos de VEGF foram analisados por PCR/RFLP e ELISA, respectivamente. Admitiu-se nível de significância para P<0.05.Resultados:O genótipo homozigoto selvagem (CC) prevaleceu em ambos os grupos (P=0,934), assim como o alelo C (P=0,938). Os níveis séricos de VEGF, analisados em 57% de SG e em 31% de CG, apresentaram valores semelhantes entre pacientes e controles (GE=307,9 ± 223,6 pg/mL; GC=305,1 ± 212,3 pg/mL; P=0,955). Notou-se maior frequência de tabagismo (44%) e hipertensão arterial sistêmica (66%) em GE versus GC (25%; 48%; P=0,01; P=0,025, respectivamente). A distribuição de etilismo e dislipidemia foi semelhante entre os grupos (P>0,05).Conclusões:Em nosso estudo com pacientes brasileiros, o polimorfismo VEGF-C936T não se associa com degeneração macular relacionada à idade, por outro lado, tabagismo e HAS são potencialmente fatores de risco independentes para a doença, enquanto níveis de VEGF semelhantes em ambos os grupos podem refletir o sucesso do tratamento farmacológico.

Detecção de chlamydia trachomatis através de testes imunológicos em população feminina adolescente e adulta na grande Cuiabá, Mato Grosso / Detection of chlamydia trachomatis by immunological methods in adult and adolescent female population in Cuiabá, Mato Grosso

Mundialmente, a infecção por Chlamydia trachomatis continua sendo um importante problema de saúde pública, especialmente para adultos jovens sexualmente ativos. Objetivo: Investigar doença sexualmente transmissível por Chlamydia trachomatis em adolescentes e jovens do sexo feminino,na faixa etária de 15 a 25 anos de idade em Cuiabá e Várzea Grande, Mato Grosso, através dos métodos imunológicos de ELISA e imunofluorescência direta. Métodos: Estudo de corte transversal quantitativo de amostras endocervicais de 328 mulheres sexualmente ativas, não grávidas, que frequentaram as Unidades Básicas de Saúde. Amostras endocervicais foram coletadas, sendo a detecção dos antígenos de Chlamydia trachomatis realizada pelos métodos ELISA e imunofluorescência direta. Resultados: Foram obtidas 11 amostras positivas por meio do ELISA (3,4%) e 69 pela imunofluorescência direta(24,4%). Observou-se elevado número de casos entre 16 a 25 anos (24,39%). Conclusão: O índice de casos positivos observado foi representativo,assemelhando-se aos encontrados em outros estudos e denotando, portanto, uma circulação de cepas de clamídia na população estudada. A amplificação das medidas profiláticas, diagnósticas e terapêuticas nos serviços públicos de saúde será um passo importante para conter o avanço da doença sexualmente transmissível, inclusive a infecção genital por Chlamydia trachomatis na população feminina

Worldwide, Chlamydia trachomatis infection remains a major public health problem, especially for sexually active young adults.Objective: To investigate the sexually transmitted disease by Chlamydia trachomatis in adolescents and young women aged 15?25 years from Cuiabáand Várzea Grande, Mato Grosso, Brazil, through the ELISA and direct immunofluorescence methods. Methods: A cross-sectional quantitative study ofendocervical samples from 328 nonpregnant, sexually active women who received care in basic health units. Endocervical samples were collected andC. trachomatis antigens detected by ELISA and direct immunofluorescence methods. Results: A total of 11 positive samples were obtained with ELISA(3.4%) and 69 with direct immunofluorescence (24.4%). The largest number of cases occurred in the 16?25 years age group (24.39%). Conclusion: Therate of positive cases observed was representative, similarly to those found in other studies, and, therefore, indicating Chlamydia strains circulating inthe population studied. Amplification of prophylactic, diagnostic, and therapeutic measures in public health services will be an important step to counterthe spread of sexually transmitted diseases, including genital infection by C. trachomatis in the female population.

Analysis of platelet eluate for the elucidation of sensitization to HLA in kidney transplant candidate / Análise do eluato de plaqueta para a elucidação da sensibilização ao HLA em um candidato ao transplante de rim

While a 42-year-old male patient was being prepared for deceased-donor renal transplantation, anti-HLA-A2 antibodies were detected in the serum by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) method. The patient denied any transfusion history and previous transplant. Crossmatch by complement dependent cytotoxicity (CDC) and CDC with anti -human globulin (CDC-AHG) proved negative with a four-cell panel with positive typing for HLA-A2. Adsorption of antibodies with platelets and analysis of eluate were suggested to elucidate discrepancies in results by ELISA and by CDC-AHG. ELISA showed that adsorbed serum with platelets did not reveal antibodies for HLA-A2 specificity and suggested that they were removed by their specific binding with HLA-A2 antigens on the platelet surface. Eluate analysis by ELISA showed antibodies for HLA-A2 specificity. No antibodies for HLA-A2 specificity in the non-adsorbed serum were detected by CDC-AHG method. Revision of patient's data showed that a previous transfusion had occurred, which may have been the source of HLA sensitization. The suggested method may be a contribution towards the evaluation of sensitivity between CDC-AHG and ELISA methods for characterizing antibodies in the patient's serum.

Enquanto um paciente do sexo masculino de 42 anos de idade estava sendo preparado para o transplante renal de doador falecido, anticorpos anti-HLA-A2 foram detectados no soro pelo método de ensaio imunoenzimático (ELISA). O paciente negava história de transfusão e transplante anterior. Prova-cruzada por citotoxicidade dependente de complemento (CDC) e CDC com antiglobulina humana (CDC-AGH) foram negativos com um painel de quatro células com tipagem positiva para HLA-A2. O método de adsorção de anticorpos com plaquetas e análise do eluato foi sugerido para explicar as discrepâncias dos resultados de ELISA e CDC-AGH. O método de ELISA mostrou que o soro adsorvido com plaquetas não revelou anticorpos para especificidade HLA-A2, sugerindo que eles foram removidos por meio de sua ligação específica com os antígenos HLA-A2 na superfície das plaquetas. A análise do eluato por ELISA mostrou anticorpos para especificidade HLA-A2. Nenhum anticorpo para especificidade HLA-A2 foi detectada no soro não adsorvido pelo método de CDC-AGH. Revisão dos dados do paciente mostrou que houve transfusão anterior, podendo ter sido a fonte de sensibilização HLA. O método sugerido é uma contribuição para avaliação da sensibilidade entre os métodos de CDC-AGH e ELISA em caracterizar anticorpos no soro do paciente.

Seroprevalencia de Ehrlichia canis en perros con sospecha de infección por patógenos transmitidos por garrapatas en Medellín, 2012-2014 / Seroprevalence of Ehrlichia canis in Dogs with Suspected Infection by Tick-Borne Pathogens in Medellín, 2012-2014 / Soroprevalência de Ehrlichia canis em cachorros com suspeita de infecção por patógenos transmitidos por carrapatos em Medellín, 2012-2014

En Colombia son exiguas las investigaciones sobre ehrlichiosis canina y en Medellín son nulas. Esta investigación tuvo como objetivo determinar la seroprevalencia de Ehrlichia canis y su distribución según sexo, edad, raza y tamaño en caninos diagnosticados en un laboratorio veterinario de Medellín, entre 2012 y 2014. Para ello se diseñó un estudio transversal en 781 caninos. Se calculó la seroprevalencia global de infección y específica según sexo, grupo de edad, tamaño y raza del canino. En el análisis bivariado se usaron las pruebas Z, chi cuadrado de Pearson y U de Mann-Whitney. En el análisis multivariado se hizo regresión logística binaria. Se incluyeron 57 razas, de las cuales las más frecuentes fueron criollos, labradores y french poodle; 54,9 % eran machos y 56,9 %, adultos. La prevalencia global de la infección fue 24,8 %; las mayores seroprevalencias específicas se observaron en las hembras (25,9 %), los seniles (29,7 %) y los pertenecientes a razas grandes (27,6 %). El riesgo de infección en adultos y seniles fue 2 veces el hallado en cachorros; la probabilidad de infección en los cocker spaniel fue 6,4 veces la hallada en los bulldog francés; el riesgo de infección en lobo siberiano, pug y labrador fue 7,8, 5,5 y 4,1 veces lo observado en los bulldog. La alta seroprevalencia de ehrlichiosis canina y la identificación de los caninos adultos, seniles y las razas cocker spaniel, lobos siberianos, pug y labradores como las de mayor riesgo evidencian la necesidad de formular programas de prevención y atención de esta infección en la ciudad.

Research is meager on canine ehrlichiosis in Colombia and it is absent in Medellín. This research aims to determine the seroprevalence of Ehrlichia canis and its distribution by sex, age, race and size in dogs diagnosed in a veterinary laboratory in Medellín, between 2012 and 2014. To the effect, a cross-sectional study was designed in 781 dogs. Overall seroprevalence of infection and specific by sex, age, size, and canine breed were calculated. In the bivariate analysis, Z test, Pearson's chi-square test, and the Mann-Whitney U test were used. In the multivariate analysis, binary logistic regression was performed. 57 races were included, of which the most frequent were Creoles, Labradors, and French poodles; 54.9% were males, and 56.9% were adults. Overall prevalence of infection was 24.8%; highest specific seroprevalences were observed in females (25.9%), senile dogs (29.7%), and those belonging to large breeds (27.6%). The risk of infection in adult and senile dogs was two times higher than in puppies; the probability of infection was 6.4 times higher in cocker spaniels than in French bulldogs; the risk of infection in Siberian wolf, pug and Labrador was 7.8, 5.5 and 4.1 times higher than in bulldogs. High seroprevalence of canine ehrlichiosis and the identification of adult and senile dogs, and cocker spaniel, Siberian wolf, pug and Labrador breeds as of higher risk show the need to develop programs for prevention and treatment of this infection in the city.

Na Colômbia são exíguas as pesquisas sobre ehrlichiosis canina e em Medellín são nulas. Esta pesquisa teve como objetivo determinar a soroprevalência de Ehrlichia canis e sua distribuição de acordo com sexo, idade, raça e tamanho em caninos diagnosticados em um laboratório veterinário de Medellín, entre 2012 e 2014. Para isso desenhou-se um estudo transversal em 781 caninos. Calculou-se a soroprevalência global de infecção e específica de acordo com sexo, grupo de idade, tamanho e raça do canino. Na análise bivariada se usaram as provas Z, chi quadrado de Pearson e U de Mann-Whitney. Na análise multivariada realizou-se regressão logística binaria. Incluíram-se 57 raças, das quais as mais frequentes foram criollos (vira-latas), labradores e french poodle; 54,9 % eram machos e 56,9 %, adultos. A prevalência global da infecção foi 24,8 %; as maiores soroprevalências específicas foram observadas nas fêmeas (25,9 %), os senis (29,7 %) e os pertencentes a raças grandes (27,6 %). O risco de infecção em adultos e senis foi 2 vezes mais do que o encontrado em filhotes; a probabilidade de infecção nos cocker spaniel foi 6,4 vezes mais do que a encontrada nos bulldog francês; o risco de infecção em lobo siberiano, pug e labrador foi 7,8, 5,5 e 4,1 vezes mais do que o encontrado nos bulldog. A alta soroprevalência de ehrlichiosis canina e a identificação dos caninos adultos, senis e as raças cocker spaniel, lobos siberianos, pug e labradores como as de maior risco evidenciam a necessidade de formular programas de prevenção e atenção desta infecção na cidade.